对于生物氧化过程中的细菌,使用时需要了解菌液中所含的细菌数量。一般有以下几种方法来衡量和测量细菌的数量:
(1)浊度法。原理是细菌是不透明的,液体的浊度随着液体中细菌的浓度而变化,然后用分光光度计测量液体的光密度。通过将测量的光密度与标准曲线进行比较,可以知道细菌溶液的密度。
(2)直接计数法。该方法是用血细胞计数器在显微镜下直接观察和计数菌液样品中的细菌数量。
(3)平板计数法。该方法包括如下步骤:取出待测菌液,稀释至一定倍数,用固体培养基制成平板,然后在一定温度下培养生长成菌落形成单位(CFU),计算菌落数,乘以稀释倍数,得到待测菌液的活菌浓度。
(4)液体稀释法。在该方法中,细菌溶液在培养基中以连续10倍系列稀释至不同浓度,然后培养。培养后,记录每个稀释度生长的试管数,然后查最概然数(MPN,见相关微生物学实验教材),根据样本的稀释倍数计算活菌含量。
(5)干细胞重量法。该方法包括以下步骤:将菌液离心或过滤,洗涤除去培养基成分,转移到合适的容器中,在100-105℃的干燥箱中干燥或在低温低压(60-80℃)下干燥至恒重,称重。一般情况下,细胞干重为细胞湿重的10% ~ 20%。对于细菌来说,一个细胞重约10-12 ~ 10-13g。
目前,采用较多的微生物生长测定方法是比浊法、直接计数法和液体稀释法。以上均为直接计数方法。此外,也有采用蛋白质分析方法来估测细菌的数量。